糖组学分析

N-糖基化位点分析

N-糖基化是一种涉及多种生理和病理过程的蛋白翻译后修饰。糖基化修饰位点的可变性是细胞活性的关键指标,血清蛋白糖基化附着位点的减少与先天性糖基化疾病(CDGs)的严重程度之间的相关性证明了这一点。因此,为了充分了解蛋白糖基化对人体健康的影响,准确确定位点占用率具有重要意义。

为了确定糖基化附着位点,通常在重水里面使用蛋白n-糖苷酶F(PNGase F)从蛋白质中分离多糖,在此过程中,原先糖基化的天冬酰胺经历脱酰胺化成为天冬氨酸,增加O18修饰。因为引入O18后分子质量发生变化,糖基化位点可以通过比较含有天冬氨酸的肽与含有非糖基化的天冬酰胺的肽进行检测。分析糖蛋白中可变N-糖基化位点的一般策略包括蛋白质使用PNGaseF酶消化、聚糖释放、液相色谱法分离糖肽和质谱检测。

基于LC-MS的N-糖基化位点附着一般分析流程

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