蛋白质组学

LabelFree定量蛋白质组学技术研究蛋白质互作——背景介绍(下)

蛋白互作的研究背景内容比较丰富,我们分成两期定量蛋白质组学非标记定LabelFree定量蛋白质组学技术研究蛋白互作的背景进行介绍。本期我们接着说蛋白-蛋白互作方法的研究背景。

蛋白互作方法的研究背景

免疫印迹或免疫沉淀逐渐转向使用质谱法进行样本中的蛋白质定量,同时,也可使用该方法进行蛋白质鉴定。质谱法为高度复合的定量分析创造了条件,为它们的快速发展提供了条件,无需考虑费时的基于抗体的方法。LC-MS/MS还促进了研究人员对蛋白质异构体和翻译后修饰(PTMs)如何控制和调节多个细胞的了解。

在蛋白质互作分析中,亲和纯化与多种定量质谱方法相结合非常常见。在本文中,我们将质谱采集策略分为“数据相关采集(DDA)”和“数据独立采集(DIA)”。目前为止,DDA最常见的用途是通过“鸟枪”技术鉴定化合物。在这些实验中,根据一组简单的启发式规则(通常是母离子强度)选择一个母离子进行碎片化,利用从所选母离子导出的MS/MS图谱进行蛋白质鉴定(图1)。相比之下,DIA并不是根据前体离子扫描中的信息来选择要进行碎片化的离子,而是在质谱仪可见范围内使整组前体离子碎片化,选择离子进行碎片化的方式区别对量化结果有重要影响。

图1. QqTOF仪器中典型“鸟枪”实验的示意图。仪器在两种不同的扫描模式之间循环。(A) 在第一模式(MS1)中,所有离子都通过仪器传输,并在检测器处检测,随后可用于母离子测定。利用简单的规则(强度、电荷状态和离子是否已经碎裂)分析导出的质谱图。通过这些规则的离子随后被分离和碎片化。(B) 在MS/MS模式下,特定质量在第一个四极体中分离,在第二个四极体中碎片化。所有的碎片离子都被记录在分析仪中,并产生MS/MS图谱,用于鉴定化合物。

质谱仪的不断创新使得检测灵敏度得到显著提高,可以检测样品中成分较少的物质。除了能够更深入地观察样品外,灵敏度的提高还可以提高仪器的扫描速度,这使得用不同的工作流程和方法进行定量和鉴定成为可能。本文我们讨论的是利用亲和纯化联合质谱技术(AP-MS)分析蛋白质-蛋白质相互作用时,肽和蛋白质的定量方法。这些方法也适用于涵盖需要量化的不同应用领域的各种其他类型样本,不过最终使用哪种方法还是由样本复杂性来决定。

下期文章中,我们将切入主题,详细介绍几种目前常用的几种研究相互作用蛋白质组学的定量蛋白质组学非标记定量LabelFree法。

本文由百泰派克生物科技整理编辑。百泰派克生物科技专注于基于质谱的蛋白质组学服务,结合亲和纯化与定量蛋白质组学非标记定量LabelFree、SILAC或SWATH定量技术,提供一系列定量蛋白质组研究策略,灵敏度高、重复性好,非常适合蛋白质相互作用的研究。

文献参考:Stephen Tate, Brett Larsen, Ron Bonner, Anne-Claude Gingras, Label-free quantitative proteomics trends for protein-protein interactions. Journal of Proteomics, 2013. 







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