蛋白质组学

[置顶]SILAC 定量蛋白质组学分析流程

Agonyr

 SILAC(Stable
Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技术是另一种常用的蛋白组定量技术,使用同位素标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸,细胞经5-6个倍增周期后,稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸,然后可对细胞中的蛋白质进行质谱鉴定和定量分析。

技术优势——目前比较蛋白质组学最先进方法

(1)高效性:SILAC是体内标记技术,标记效率可高达100%;

(2)定量精确:线性范围广,降低由于样品制备不同而造成的实验内差异;

(3)高通量、灵敏度高:可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质,且检可测测到纳克级水平;

(4)相容性:可以对多种在DMEM或RPMI 1640培养基中能够培养的细胞或细菌中表达的蛋白进行标记;

(5)灵活性:在缺乏L-赖氨酸和L-精氨酸的培养基中添加同位素标记的这两种氨基酸,操作方便。

细胞经过传代培养7天后,同一肽段被“重”型肽段取代

实验流程:

1.  稳定同位素标记与标记效率检测

2.  对照组和实验组细胞扩大培养

3.  细胞组分总蛋白的提取和酶解

4.  液质联用串联质谱分析







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