蛋白质组学

利用疏水材质,节省抗体的WB的方法 –

WB(western blot)实验,为分子生物学经典实验之一。常用来进行蛋白分子量估算,蛋白功能研究等实验。

在该实验中,需要进行一抗、二抗及荧光底物孵育等过程。常规情况下将经过转印的PVDF膜等于玻璃皿中或者杂交袋中与抗体孵育。但是,在玻璃皿中孵育,常常使用抗体的量较大,且抗体回收导致抗体的质量下降;在杂交袋中孵育,虽然使用抗体较少,但是常导致杂交袋和转印膜(PVDF膜等)的表面相互摩擦,导致抗体抗原相互作用减弱,对于靶蛋白定量有较大的影响。

在实验过程中,经过逐渐摸索,发现一种新的方法抗原抗体孵育方法。

由于转印膜(PVDF膜等)为疏水性材质,可以将其与表面为疏水性的材质(石蜡膜parafilm等)放置在一起,将抗体滴加在转印膜表面,水平放置,于室温或者37摄氏度放置,进行抗原抗体反应。由于石蜡膜等材质的疏水性,致使抗体稀释液不会向转印膜的周围扩散,使滴加的抗体液一直保存于转印膜的表面,充分与抗原反应;同时,如果抗体十分珍贵且必须回收,将转印膜移去后,抗体依然可以回收。该方法使用一抗或者二抗的量十分少,仅500ul/20cm2左右(即25ul/平方厘米)。

具体的操作方法可以如下:
1. 将疏水性的材质,如石蜡膜,仅仅的贴附在玻璃等表面,保证其不会滑动。
2. 将PVDF膜正面向上,轻轻的放置于石蜡膜等疏水性材质的表面。
3. 保证转印膜不干燥的情况下,尽快滴加抗体。
4. 可以将上述玻璃板放置于湿盒之上,保证抗体稀释液不会在孵育过程中蒸发干。

图示如下:

目前所知,该方法最早来源于上海神经所段波博士。后经昆明动物研究所分子病理组改善。如擅自申请专利等,有任何法律责任,请自负。

(责任编辑:大汉昆仑王)

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