蛋白质组学

蛋白质浓缩问题——超滤浓缩管的使用及保存 –

1.1 浓缩样品

1、要浓缩的样品含盐量必须0.3M以上,含盐量低的样品须补加到0.3MNaCl。

2、在内管(附有3KD膜)中加入500µl样品,将内管套入外管。

3、对称放置离心管,14520rpm(即14000g)离心。(离心5min约浓缩2倍,10min约4倍,15min约6倍,20min约8倍,30min约10倍)。

4、离心结束后,将内管倒置套在另一个干净的离心管呢,3880rpm离心min收集浓缩后的样品。或者用移液器直接吸出内管中的样品。

1.2 浓缩管使用后的处理和保存


1、使用完的浓缩管,立即加入500µl含1MNaCl的缓冲液(此缓冲液与浓缩样品的缓冲液一致),8000rpm离心20min。

2、甩净内管中的盐溶液,将内管放入超纯水中浸泡1h。

3、内管加入超纯水500µl,8000rpm离心5min。

4、甩净内管中的水,加入500µl0.2MNaOH,8000rpm离心20min。

5、甩净内管中的NaOH溶液,用超纯水再8000rpm离心5min。

6、甩净内管中的水,放入含0.2-0.5‰NaN3的生理盐水中。

7、外管用自来水洗净后,用超纯水冲洗干净,晾干。

(责任编辑:大汉昆仑王)

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