蛋白质组学

如何提高目的蛋白的可溶性表达

在大肠杆菌 中,当外源蛋白高水平表达的时候,极易形成包涵体,为蛋白纯化 等下游工作带来很大的麻烦。

下面是一些可以参考的有助于提高目的蛋白可溶性表达的实验 方案:

1. 降低蛋白合成的速度。

可以通过以下方法实现:
a. 降低培养温度
b. 使用弱启动子
c. 使用低拷贝数的质粒 表达载体
d. 降低诱导物的浓度

2. 改变培养基 。

a. 培养基中加入可以帮助蛋白折叠的因子
b. 加入缓冲液保持pH稳定
c. 加入1%的葡萄糖,抑制lac启动子
d. 加入山梨糖醇等可以稳定蛋白天然结构的因子
e. 加入乙醇, thiols and disulfides等

3. 与分子 伴侣或折叠酶共表达。

常用的分子伴侣有:
GroES-GroEL
DnaK-DnaJ-GrpE
ClpB

常用的折叠酶有:
peptidyl prolyl cis/trans isomerases (PPI's)
disulfide oxidoreductase (DsbA) and disulfide isomerase (DsbC)
protein disulfide isomerase (PDI)

4. 分泌表达。使目的蛋白分泌到周质空间。

周质空间的氧化性的环境有利于二硫键的形成,而胞内则是还原性的。
周质空间有折叠酶DsbA和DsbC的存在,帮助蛋白正确折叠。
周质空间很少有蛋白酶存在,不会被水解。
可以使对细胞 有毒性的蛋白大量存在。

5. 使用特定的菌株 。

AD494, which has a mutation in thioredoxin reductase (trxB).
Origami ,a double mutant in thioredoxin reductase (trxB) and glutathione reductase (gor).

6. 与可溶性partner融合表达。

7. 表达目的蛋白的一个片段 。> 70 kDa的蛋白在大肠杆菌中是很难表达的。

8. 体外去折叠,重新折叠。

(责任编辑:大汉昆仑王)

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