蛋白质组学

纤维连接蛋白(nbronectin,Fn)的测定

纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)是一组高分子糖蛋白,广泛存在于细胞表面、细胞外液及结缔组织有关的基底膜上。Fn具有促进细胞粘连,细胞与纤维、基质间的连接;促进巨噬细胞的吞噬功能等广泛生物学活性;并与机体创伤组织愈合、组织炎症、纤维化及硬化过程等密切相关。因此,Fn的含量变化与临床多种疾病的严重程度和转归密切相关。

检测Fn的方法常用单向免疫扩散法、胶乳凝集法、间接血凝法、激光免疫比浊法以及ELISA法,后者定量较精确,特介绍如下。

1.试剂 ①Fn的制备:主要流程为将新鲜人血浆流穿空白Sepharose-4B柱一收集含蛋白流穿液一流穿明胶Sepharose4B柱一7mol/L尿素解吸(Fnl)一流穿抗无Fn的人血清-Sepharose-4B柱(Fn2)一流穿抗人IZC-Sepharose-4B柱一Fn3(即纯化的h);②Fn McAb制备:用纯化Pn 2mg免疫BALB/c小鼠(首剂加福氏完全佐剂),以后每间隔10d用同样剂量追加免疫。细胞融合前3d加强免疫一次。有关细胞融合技术及McAb提取。

2.操作步骤 取最适工作浓度的Fn McAb 0.1mL包被微孔反应板,4~C过夜,洗涤后加待测标本0.1mL(尿液不稀释,胸腹水、血清作1:10稀释),370C 2h;洗涤后再加入最适工作浓度的HRP标记的Fn McAb0.1mL,37~C 2h;洗后加OPD-H20:底物显色。在酶标仪上,读吸光度值。同时用标准参考血清绘制标准曲线,算出待测标品中Fn含量。

3.正常参考值与临床意义 血清Fn含量低于血浆,约为血浆含量的67%。成人血清Fn含量为231±46mg_/L。ELISA检测正常人尿中Fn <0.47mS/Lo

血浆(血清) Fn降低见于许多疾病,尤其是在某些危重疾病,若持续低值则预后不良,回升者预后较好。急性肝炎、慢性活动性肝炎、重症肝炎、失代偿的肝硬化病人、肝癌病人尤其是广泛性肝转移者,Fn含量显著降低,可能是由于Fn合成减少,消耗增多之故。类风湿性关节炎时血浆(血清) Fn正常,但病变关节液中Fn浓度常数倍于血浆浓度,提示滑膜受炎症刺激后Fn的合成增加。

恶性肿瘤腹水Fn值显著高于肝硬化腹水。结核、结缔组织病、间皮瘤患者胸液Fn含量明显高于肿瘤患者。肾病患者尿液中h含量增高,且多为IgA型肾病。

(责任编辑:大汉昆仑王)

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