蛋白质组学

福林酚试剂法测定蛋白质含量

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一、原理:蛋白质与福林酚试剂反应,生成深蓝色复合物。蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。可用分光光度计 于500nm波长下进行测定。与标准曲线对照,而确定蛋白质含量。

二、试剂与材料

标准酪蛋白溶液(250ug/ml):酪蛋白预先用微量凯氏定氮法测定纯度,再称量制备。也可用250ug/ml牛血清蛋白 质标准溶液。

福林酚试剂:吸取试剂A(0.2M氢氧化钠与4%无水碳酸钠溶液等体积混合)100ml,加入试剂B(2%酒石酸钾钠溶液与1%五水硫酸铜等体积混合)2ml混合而成。

福林酚试剂乙:吸取5ml苯酚试剂加入5ml蒸馏水稀释而成。

分光光度计、恒温水浴槽、蛋白质样品

三、操作方法

1、标准曲线的制作:分别吸取0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml标准溶液于小试管中,分别加进不同量的蒸馏水,补足到1ml。各加入5ml试剂甲,混匀后于室温下(25℃左右)放置10min。再加入0.5ml试剂乙,立即混匀,于室温下反应30min。于500nm波长下测定光密度。以吸光值作为纵坐标,蛋白质含量为横坐标绘制标准曲线。

2、样品蛋白质含量的测定

取1ml样品溶液,加入5ml试剂甲,混匀,于25℃左右放置10min。再加入0.5ml试剂乙,立即摇匀,于25℃左右反应30min,测定吸光值,从标准曲线查出样品蛋白质含量。

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