蛋白质组学

银染

一、材料与试剂

1. 99.5%乙醇

2. 100%乙酸

3. 亚硫酸氢钠

4. 硝酸银

5. 甲醛溶液(37%)

6. 碳酸钠

7. 硫代硫酸钠

8. EDTA

二、配方

1. 固定液:30%乙醇1:10%乙酸(160 ml:50 ml:290 ml H2O)。

2. 30%乙醇。

3. 感光液:硫代硫酸钠25 mg/100 ml(通常现用现配)。

4. 染色液:0.2%AgNO3(需20%AgNO3母液400 ul/40 ml)。(注意,染色液是很强的氧化剂)+3 ul/40 ml甲醛溶液(36-38%,必须现用现配)。

5. 显影液:6%碳酸钠(3 g/50 ml),4 ug/ml 硫代硫酸钠(Na2S2O3,需4 mg/ml 母液50 ul,在冰箱中可保存几周)+甲醛溶液25 ul/50 ml,必须现用现配。

溶液中不要加入过多的甲醛,否则会产生过深的背景。使用新配的硫代硫酸钠溶液(4 mg/ml),可以得到更好的结果。

三、仪器设备

1. 摇床

四、实验步骤

1. 将胶在固定液中孵育过夜,或在摇床上慢摇2小时。

2. 在摇床上用30%乙醇洗涤胶,3×10 min。

3. 用纯水洗涤胶,2×10 min。

4. 将胶孵育在感光液中1分钟。

5. 用纯水洗涤胶,2×1 min。

6. 将胶孵育在染色液中25分钟。

7. 用纯水洗涤胶1 min。

8. 将胶在显影液中,摇床轻晃2~3分钟。

9. 在有条带出现后,加入终止液。

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