蛋白质组学

凝胶层析法蛋白质脱盐

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一、原理:含盐蛋白质溶液流经凝胶层析柱 时,低相对分子 量的盐分子 因浸入凝胶颗粒的微孔中,所以向下移动的速度较慢;而大分子的蛋白质不能进入凝胶颗粒的微孔,以较快的速度流过凝胶柱,从而使蛋白质与盐分开。
二、材料与试剂:葡聚糖凝胶(Sephadex G25)、洗脱液(蒸馏水或适宜的缓冲溶液)、含盐的蛋白质溶液、蛋白质检测试剂、无机盐检测试剂(依具体情况而定)
三、操作方法
1、凝胶的准备:称取葡聚糖5g,加入80ml洗脱液(可用水或适宜的缓冲液),在沸水浴中溶胀30min,用倾泻去悬浮的小颗粒。然后装进内径1-1.2cm,高30-40cm的玻璃柱内。注意装填均匀,无气泡和裂纹存在,并保持液面在凝胶表面以上。
2、加样与洗脱:打开柱的出口,让柱内的液体慢慢流出,直至液面与凝胶床表面相平,然后加入2ml含盐蛋白质溶液,至样品液面刚好到达凝胶床表面时,加入30ml洗脱液(与溶胀和装柱时所用液体完全相同),以0.5-1ml/min的流速洗脱,每5ml装试管分布收集。
3、收集的蛋白质溶液可用280nm处的紫外光吸收法检测,也可用福林酚测定。而盐根据具体的盐确定检测方法。

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