蛋白质组学

人血浆中缓激肽的SPE LC-MS/MS定量检测方法开发

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缓激肽是一种含有9种氨基酸的生理和药理活性肽,由蛋白质 的激肽基团衍生而来。激肽是可以促使血管舒张、血管通透性增强、一氧化氮释放和花生四烯酸流动的效应因子。它是血压、肾功能和心脏功能的重要调节因子,还参与炎症反应。缓激肽可引起血管扩张,从而导致血压降低。

因此,对这种激素肽的变化进行高灵敏度、高选择性和高准确度地定量,并将其作为疾病进展或药物治疗的评估指标,将会极为有利。尽管以往都是通过配体结合试验(LBAs)对生物制剂进行定量分析 ,但在过去几年中利用LC-MS/MS分析大分子已成为一种趋势。这在某种程度上是因为LBAs产生显著的交叉反应问题并且缺乏标准化。

LC-MS/MS具有多种优势,例如开发时间更短、准确度和精度更高、可重复进样,并且容易区分相似度很高的类似物、代谢物或内源性干扰物。常见的肽通常难以通过LC-MS/MS进行分析 ,这是因为其不易离子化以及不易产生理想的碎片离子而导致MS灵敏度较低,从而使得LC和样品制备方法开发非常困难。由于缓激肽在血浆中的浓度低至pg/mL水平且代谢速度快,在采血和样品制备过程中还可通过蛋白水解人为生成,因此对其进行准确定量相当困难。

本研究采用了专门设计的血液收集技术以防止体外缓激肽的形成,并且利用混合型固相萃取 (SPE)和高效实心核颗粒色谱柱,最大限度降低并消除基质干扰的同时提高定量分析的灵敏度。

解决方案

ACQUITY UPLC® 系统

Xevo TQ-S质谱仪

CORTECS UPLC C18色谱 柱

Oasis WCX 96孔µElution提取板

ACQUITY® 96孔收集板

应用优势

■ 使用CORT ECS™ UPLC® 色谱柱有利于获得较窄的峰宽、改善灵敏度和分离度,并消除基质干扰

■ 采用Oasis® WCX(一种混合型吸附剂)的SPE方法降低了基质干扰并提高了血浆中缓激肽提取的选择性

■ Oasis μElution96孔板可浓缩样品,并在最大程度上减少肽损失,使血浆中缓激肽的检测限达到5 pg/mL

■ 选择性高的快速SPE提取(<30 分钟)省去了耗时的免疫 亲和纯化步骤

■ Xevo® TQ-S MS可实现与免疫检测方法相匹配的高灵敏度,但与后者相比更加省时省力

■ 与传统LBA方法相比更为准确精密

■ 分析速度快,只需3.5分钟,大大提高了工作效率

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