蛋白质组学

蛋白透析中的沉淀问题分析和解决

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蛋白透析时产生的絮状沉淀真的令不少人痛心不已,有时明明看了又看,都没发现哪里不对,那么,这其中可能是哪里出现问题,还有这些问题从哪些方面着手解决最合适呢?请看下文分析:

蛋白透析产生沉淀可能有以下原因:

1.由高浓度的蛋白变性试剂(如8m尿素),到低浓度,再到不含变性剂的buffer,如果条件变化剧烈,使得蛋白不正确折叠而沉淀,这种情况比较常见。如果选择透析的方法,一定要多加几个中间浓度梯度,而且注意低温(4度),这有利于蛋白正确折叠。

2.透析袋本身有一定的吸附,可以通过磁力搅拌来降低吸附。

3.透析液PH靠近等电点,像catzp说的,换buffer。

4.透析袋不干净?楼主不会范这种错误吧。或者没认真处理,有杂质、金属离子

建议:

1 可以采用梯度浓度透析,先采用与你纯化后蛋白盐浓度相近的透析液透析,4-8小时后换更小浓度的盐溶液透析,最后采用生理盐水或PBS (pH 7.4)透析。

例如:用6M盐酸胍沉淀的目的蛋白,第一步透析可采用4M盐酸胍透析,4-8小时后采用2M盐酸胍透析,再之后可以使用PBS 或生理盐水。

2 透析液的pH值不要和目的蛋白的等电点接近,这样目的蛋白可能会更容易沉淀。

3 保持蛋白浓度在mg/ml量级上面。

4 用20mM的醋酸透析也能降低沉淀

5 加一些保护剂,如蔗糖,甘油,巯基乙醇等。

6 减少脱盐时间。可考虑用超滤或者G系列的凝胶脱盐,这样时间较快,减少蛋白质的变性。

7 增加蛋白质浓度也可在一定程度上减少透析过程中蛋白质的沉淀,不过效果不是特别好的。

8 最后,不排除是蛋白不稳定的可能性,可在提纯开始时加点甘油,浓度控制在10-25%左右。

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