蛋白质组学

蛋白质的等电点

求助:蛋白长期保存在处于等电点附近的缓冲液中,是否会影响其稳定性呢?

为何有此说法?一般说如果溶液pH值和其本身等电点相近,蛋白质溶液沉淀。

蛋白质要长期保存最好能够冻干以干粉状保存!另外如果要在缓冲液中保存最好应该避免极端pH值缓冲液和近等电点pH值缓冲液;如果由于实验的需要不好避免的话还是分装以后低温保存,每次解冻后即用,避免反复冻融对蛋白的影响!

在等电点附近保存蛋白,一般来说肯定是不可以长时间保存的。

等电点沉淀:在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。所有的蛋白质都具有等电点,在等电点时它们的电荷为零,溶解度最小,但是不一定所有的蛋白质在等电点都会沉淀。

稳不稳定取决于蛋白,不是所有的蛋白在等电点处都沉淀,得看你的蛋白实验结果。但如果不是必须,应尽量避免进等电点附近的缓冲液条件下保存,如果蛋白沉淀过程中沉淀的蛋白可能变性失活。

摘抄:长期保存要根据蛋白质的稳定性选择合适的方法:
1. 在硫酸铵溶液中将沉淀以悬浮形式保存于4度
2.硫酸铵沉淀蛋白后20000g 离心10分,液氮中冷冻后储存于-80度
3.蛋白质以冻干粉的形式保存
4.甘油可有效提高蛋白的稳定性,溶液在低温非冷冻状态下保存。(甘油储存液50%。工作液含20-30%甘油。

我也觉得干粉冻干比较好,可以长期保存。要是冷冻就要避免反复冻融,要是冷藏最好过滤除菌,不过时间过长可能还会有沉淀的。

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