蛋白质组学

western使用试剂汇总—-实际操作版

western使用试剂汇总
个人做western已快半年,下面把个人用过的试剂总结一下,可能每个人做的蛋白不一样会有少许出入。但以下试剂应该是必备!希望对各位新做western的朋友有个帮助。
主要产品可在公司订购。建议刚开始做先不要买小公司产品,尽量用大公司成套产品做稳定了,再想着从小公司买便宜试剂或粉剂自己配制,以节约费用。其实国内许多公司的成套试剂,质量还不错,比自己配要方便,节约时间。

一般产品公司的网站都有详细说明书,请认真查阅!为了防止被误认为是做广告嫌疑,将自己用的试剂公司名字暂略(其实主要的还是那几家),但是给出了参考价格,方便大家事先做好预算,好跟老板汇报。

好,下面是常用的试剂
我尽量按照做western的顺序来讲

一、  样品制备
货号 名称 规格 单价
P0013 Western及IP细胞裂解液 100ml 158.00元
ST506 PMSF(100mM) 10ml 92.00元
P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒 200次 139.00元

二、蛋白电泳
P0012A SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 1盒 139.00元
P0014A SDS-PAGE电泳液 1L 26.00元
P0015 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) 2ml 26.00元
P0017 考马斯亮蓝快速染色液 250ml 136.00元
P0068 彩色预染蛋白质分子量标准 200微升 368.00元

三、转膜
膜,有硝酸纤维素膜和PVDF膜两种,推荐PVDF膜,做的多就买成卷的,大约2500左右一卷,30cm*3000cm,做得少就买一张一张的15cm*15cm大约80元一张。膜的孔径分22um和40多um的,孔径校,蛋白不容易转通。基本都是进口膜!质量应该不差。
P0021A Western转膜液 1L 30.00元
P0022 丽春红染色液 120ml 85.00元

四、抗体孵育
P0023B Western封闭液 100ml 96.00元 (PS:也可以用5%脱脂牛奶代替专用封闭液,光明牌,大约三十一包,超市有卖!如用牛奶配请自行调整浓度一般在3-10%之间)
P0023A Western一抗稀释液 100ml 96.00元

一抗 请订购外国公司产品如sant cruse、sigma、 ABcam,大公司产品质量稳定,效价高!节省时间!

内参:下面三种常见内参请根据自己试验挑选,网站有说明
AT819 Tubulin抗体 >40次 378.00元
AA128 Actin抗体 >40次 378.00元
AG019 GAPDH抗体 >40次 378.00元

二抗、根据一抗的种类来定,一般从代理那里订购外国公司一抗,免费赠送二抗!推荐北京中杉或者武汉博士德二抗,性价比不错!大约100一支。

洗膜用吐温和PBS配,现用现配
PBS 买武汉博士德或北京中杉的,1L/包,大约4-5元一包,先买十包,若是两个蛋白,认真做重复三次的话,估计买个100包也不会嫌多。
ST825 Tween-20/吐温-20 100ml 39.00元

五、显影
P0018 BeyoECL Plus 共100ml 258.00元
还有若要做DAB显色的话可以向代理买北京中杉的DAB染色液,100多一盒。

显影液、定影液向代理(025-52983612)购买,比碧云天便宜!大约25一包,一包可配1加仑,约3.75L。
胶片,买柯达的就可以一包,100张,160元左右。
红灯,照相器材市场有卖,买10元一个的冷光源红灯,不会曝光片子。

其它试剂请参见western操作手册,如果有兴趣,部分试剂可以自己按照手册内容配置。

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