蛋白质组学

有关核蛋白提取液配制的问题

我是第一次进行核蛋白提取,从文献上查到细胞裂解液和细胞核裂解液的配方如下
细胞裂解液A液配方为:
1 10mmol/L的Hepes(PH 7.9)
2 10mmol/L KCl
3 1.5mmol/L MgCl2
4 0.2%Igepal
5 0.5mmo/L EDTA
6 0.1mmol/L EGTA
7 1mmol/L DTT
8 0.25mmol/L PMSF
配置细胞核裂解液B液方案:
1 20mmol/L的Hepe(PH 7.9)
2 420mmol/L NaCl
3 1.5mmol/L MgCl2
4 2%Igepal
5 0.5mmo/L EDTA
6 20%甘油
7 1mmol/L DTT
8 0.25mmol/L PMSF
9 5ug/ml Aprotinin
10 5ug/ml Pepstatin
11 5ug/ml Leupeptin)
现在有以下几个问题:1.我没有购买到Igepal这个试剂,改用NP-40可以吗?浓度需要调整吗?
2.PMSF是需要在临用前加吗?还是可以直接将A液和B液全部按照配方配好保存呢?如果能够保存,保存的环境什么讲究吗?
3.我在预备A液的过程中发现PMSF比较难溶解,似乎还有其他一些成分没有完全溶解,通过搅拌或者加热都没有溶解完全,请问有没有其他人碰到类似问题?有没有好的办法可以解决?
由于本人是第一次接触这个领域,还请各位大虾多多指教!如果能够把A液和B液的各成分主要作用讲解一下的话本人更是不胜感激!
(0)

热评文章

发表评论