蛋白质组学

双向电泳操作手册(中文译本)

概述... 1
手册的概述... 1
双向(2-D)电泳概述... 1
手册中使用的标记符号... 2
第一向等电聚焦(IEF)的仪器选择... 3
第二向SDS-PAGE电泳设备的选择... 4
仪器的选择... 6
等电聚焦系统的选择... 6
第二向电泳的设备选择... 8
MultiphorII平板型设备... 8
垂直系统... 9
实验室技术... 9
第一章... 11
样品制备... 11
1.0 样品制备——一般策略... 11
1.1 细胞破碎的方法... 13
1.1.1 温和的裂解方法... 13
1.1.2 剧烈的裂解方法... 15
1.2 防止蛋白质水解... 16
1.3 蛋白质沉淀... 18
1.4 除去影响双向电泳结果的污染物... 20
1.5 样品溶液的组成... 23
第二章... 25
第一向等电聚焦(IEF)25
2.0 第一向等电聚焦——概述... 25
2.1 等电聚焦(IEF)的背景... 25
2.2固相pH梯度选择... 29
2.3加样方法的选择... 30
2.4 IPG干胶条再水化溶液... 31
2.4.1再水化液的组成... 31
2.4.2再水化液的准备... 34
2.5 MultiphorⅡ和Immobiline干胶条套件(Immobiline DryStrip Kit)... 34
2.5.1 IPG干胶条再水化——Immobiline干胶条再泡胀盘(Immobiline DryStrip Reswelling Tray) 34
2.5.2准备等电聚焦(IEF)... 36
2.5.3 样品杯加样... 38
2.5.4 纸桥(paper-bridge)上样(图16)40
2.5.5 等电聚焦的原则... 40
2.5.6 方法举例—Multiphor II41
2.5.7 电泳... 41
2.5.8 聚焦后的胶条保存... 43
2.5.9 问题解决... 43
2.6 Ettan IPGphor 等电聚焦设备... 45
2.6.1 IPG干胶条再水化—Ettan IPGphor胶条槽... 46
2.6.2 IPG干胶条再水化——用于Ettan IPGphor 杯上样胶条槽... 49
2.6.3等电聚焦原则... 54
2.6.4 方法举例—IPGhor55
2.6.5 进行电泳(Running a protocol)... 56
2.6.6 问题解决... 59
第三章... 61
第二向SDS-PAGE. 61
3.0第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳-概述... 61
3.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的背景... 61
3.2 IPG胶条平衡... 62
3.2.1平衡溶液成分... 62
3.2.2平衡步骤... 63
3.3 Ettan DALTtwelve系统... 64
3.3.1准备Ettan DALTtwelve分离单元... 64
3.3.2 Ettan DALT预制胶... 65
3.3.3 平衡IPG胶条... 67
3.3.4 放置平衡的IPG胶条... 67
3.3.5 将预制胶模具插入Ettan DALTtwelve分离单元中... 68
3.3.6.电泳条件... 69
3.3.7 准备SDS凝胶——垂直系统... 70
3.3.8 问题解决... 73
3.4 MultiphorII平板电泳设备... 74
3.4.1 ExcelGel的准备... 74
3.4.2放置平衡后的IPG胶条... 76
3.4.3 电泳条件... 77
3.4.4 问题解决... 77
第4章... 79
染色及结果分析... 79
4.0 对电泳的结果进行染色... 79
4.1印迹... 80
4.2 分析... 81
4.3结果标准化... 82
4.4 蛋白点的后续分析... 82
4.4.1 切点... 82
4.4.2 蛋白的酶解... 83
4.4.3 MALDI-ToF 质谱... 83
第五章... 84
问题解决方法... 84
5.0 双向电泳的问题解决方法... 84
附录I94
溶液... 94
A.样品裂解液... 94
B.不含有IPG缓冲液的再水化储存液*94
C.含有IPG缓冲液的再水化储存液*95
D.SDS平衡缓冲液*. 95
E.单体储液... 96
F.4×分离胶缓冲液... 96
G.10%SDS. 96
H.10%过硫酸铵... 96
I.凝胶储存液... 97
J.SDS电泳缓冲液*97
K.琼脂糖密封液... 97
附录II 用PlusOne蛋白银染试剂盒染Ettan DALT凝胶的优化方法... 98
参考文献... 99
其它读物和参考材料... 104
推荐的其它耗材... 104
订购信息... 105

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