蛋白质组学

皮尔斯的发光底物比GE的差很多,多图

实验过程:
1. 将SIGMA公司HRP标记的羊抗兔1:10,000开始,5倍稀释。
点1ul到NC膜上,点完后迅速泡到PBS里。
2. 配好发光底物后取出膜,将SuperSignal West Pico与ELC prime 分别加200ul到两块膜上。1min后,在膜表面覆盖塑料膜。
3. 照相
4. 将照相后的膜使用蒸馏水冲洗,然后加入TMB显色底物显色,看两膜显色深浅有无差别。
结果:1. 发光情况

30s结果

1m30s

5m30s

20m30s

从以上图片可以看出,SuperSignal West Pico比ELC prime灵敏度约低25倍。
2. 两张膜上上样量有无区别?

从图上可以看出,加入TMB显色底物后,两膜第三点均能显色,而第四点均不显色。说明上样无明显区别。
结论:SuperSignal West Pico灵敏度较低,与TMB显色相近。(sigma的TMB显色液标称灵敏度0.125ng)

跟他们公司的技术沟通了下,结果回复:感谢您致电Thermo Fisher Scientific,并使用我们的产品!
从您目前使用我们的底物情况来看,在建议抗体浓度范围内可以获得光信号,我们认为此底物是正常工作的。由于我们提供的产品出厂前都是经过严格的质量认证,而此认证数据不是依赖于与其他公司产品的比较得出。实验中各种条件的差别也不能在一次实验中反映,所以对您提供的结果我们无法做出评价和解释。

很是无语。

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