蛋白质组学

开张大吉!蛋白质技术:一篇关于衣原体对我影响很深的文章。

文章标题:蛋白质技术:一篇关于衣原体对我影响很深的文章。

作者:Klein M, Kotz A, Bernardo K, Kronke M.

文题:Detection of Chlamydia pneumoniae-specific antibodies binding to the VD2 and VD3 regions of the major outer membrane protein.

杂志全名(或缩写):J Clin Microbiol.

年份,卷(期):2003 May;41(5)

起止页码:1957-62

摘要及翻译:

Abstract:

Although Chlamydia pneumoniae is an important human pathogen, the antigens eliciting a specific humoral immune response remain elusive. We scrutinized several recombinant chlamydial surface proteins for species-specific recognition by a panel of human sera previously tested for the presence of anti-C. pneumoniae and anti-C. trachomatis antibodies by microimmunofluorescence and enzyme-linked immunosorbent assay. The 15-kDa cysteine-rich protein (CrpA), porin-b ( PorB ), 9-kDa outer membrane protein (OMP3), 60-kDa outer membrane protein (OMP2), and four fragments of the major outer membrane protein (MOMP) representing each variable domain (VD) were overexpressed in Escherichia coli, affinity purified, and employed for Western blot analysis. None of the sera tested contained antibodies recognizing PorB and OMP3 of C. pneumoniae. Sera from C. pneumoniae-immune patients cross-reacted with OMP2 of C. trachomatis, and sera from C. trachomatis-immune patients cross-reacted with CrpA of C. pneumoniae, indicating that some of chlamydial surface molecules share antigenic epitopes. In contrast, the VD2, as well as the VD3, regions of the MOMP of C. pneumoniae were only recognized by C. pneumoniae-positive sera, suggesting the existence of species-specific epitopes. The identification of such epitopes of cell surface molecules provides new insights into C. pneumoniae-specific immune responses and may be of value for the improvement of C. pneumoniae-specific diagnostic assay systems based on defined recombinant antigens.

摘要翻译(翻译不当之处请不吝指教):

尽管肺炎衣原体是一种重要的人类致病原,但是对于能够激发特异性免疫应答的抗原仍然不是十分了解。通过MIF和ELISA检测,我们提前准备了一组体内含有抗肺炎衣原体和抗沙眼衣原体抗体的病人血清,然后我们筛选出了几种能够为这些血清所特异性识别的衣原体重组表面蛋白。 我们表达、纯化、并用western检测了如下几种蛋白:15KD的富含半胱氨酸蛋白(CrpA)、Porin-b(PorB)、9KD的外膜蛋白(OMP3)、60KD的外膜蛋白(OMP2)以及针对主要外膜蛋白(MOMP)的4个片段。我们并未发现能够识别PorB和OMP3的血清,肺炎衣原体免疫的病人血清能够与沙眼衣原体的OMP2产生交叉反应,肺炎衣原体免疫的病人血清能够与肺炎衣原体的CrpA产生交叉反应。这些结果都说明了一些衣原体表面分子可以有共同的抗原表位。相反,衣原体MOMP的VD2和VD3区则只能被肺炎衣原体阳性血清所识别,这说明VD2和VD3区存在种属特异性的表位。这种细胞表面分子表位的确定为肺炎衣原体特异性免疫应答反应的机理提供了新的理论基础,而且对于以重组抗原为基础的肺炎衣原体特异性诊断方法来说,这一发现可能更具价值。

读后感:

看了文献之后我们得到信息:肺炎衣原体的2、3两个可变区内存在一些特异性的抗原决定簇。那么可以肯定的是如果我们表达这两个可变区的重组蛋白的话,可能很少与针对其他蛋白产生的抗体有交叉反应。这样一来这个蛋白的特异性就是很高的,而且对于肺炎衣原体的研究来说是很重要的。我们可以试想一下,如果一旦这个重组蛋白的抗原性也非常好的话,那么用这个蛋白来制备单抗的话,就有很高的特异性和敏感性,这也是做单抗所需要的基本的条件。产生这个想法之后我们再多方面查阅其他资料,以进一步确定我们的想法。如果最后确定我们的这个想法是可行的的话,就可以进入试验阶段了。而且这个课题做起来也不小,从基因克隆到单抗制备,工作量很大。对于一个小硕来说,有多么大的创新几乎是不现实的,那么我们就在硕士期间多掌握一些试验操作,为将来的科研生活打好基础这才是最主要的。以上就是我读了这篇文章之后的一些感想。如果有对这方面感兴趣的的战友可以讨论一下这篇文章,谈谈你是怎么理解的,可以从这篇文章中得到什么。

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