蛋白质组学

双向电泳蛋白点的切取和保存

1. 用 PDQuest软件或肉眼比对,找出感兴趣的蛋白点,并做好标记和记录。

2. 用 MilliQ水冲洗胶 2 次。

3. 用色谱纯甲醇和 MilliQ水冲洗 Ep 管

4. 将枪头(200μl)下端剪去,使其内径略小于蛋白斑点的直径,用色谱纯甲醇和MilliQ水冲洗枪头。

5. 对准斑点中央小心将蛋白切割下来,放入Ep 管,MilliQ水漂洗 2 次,如胶块 太大,将其切成 1 x 1 mm 的胶片。

6. 将切好的点做好标记和记录,置- 80℃ 保存或冻干后- 20℃ 存放。

注意事项:

1. 尽量避免皮肤和头发的角蛋白的污染,在操作过程中应戴一次性的 PE 手套 (不用乳胶手套)和帽子。

2. 不要将胶长期存放于乙酸溶液中。

3. Ep 管及染胶的容器必须用甲醇和水充分清洗,尤其应与进行Western blotting 的容器分开,以避免 casein 或 BSA 的污染。

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