蛋白质组学

免疫电泳实验

免疫电泳(immunoelectrophoresis )是将电泳和琼脂扩散结合起来,用于分析抗原组成的一种定型方法,具有灵敏快速的优点。该实验可分为如下两个步骤:

1.电泳 将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离。由于各种可溶性蛋白分子的大小、质量与所带电荷不同,在电场的作用下,其带电分子的运动速度具有一定的规律,因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开。

2.琼脂扩散 电泳后在琼脂槽中加入相应抗血清,然后置湿盒内进行双扩散。当抗原与抗体相遇且比例适合时,可形成不溶性复合物,出现特异性沉淀线,根据沉淀线的数量和位置,可鉴定分析各种抗原成分及其性质。

【材料】

1.抗原:正常人血清;抗体:兔抗人血清。

2.1% 离子琼脂(用离子强度 0.05 、pH8.6 的巴比妥缓冲液配制)。

3.载玻片、直径 3mm 的打孔器、2 × 6 × 6 聚苯乙烯塑料条、微量加样器、电泳仪、吸管等。

【方法】

1.制琼脂板 载玻片放于水平台面上,将塑料条放置于玻片中央,吸取 4ml 热熔的 1% 离子

琼脂于其上,待凝固后,取出塑料条,即制成琼脂槽。再按图 6-2 打孔。

2.加样 用微量加样器往孔中加正常人血清。

3.电泳 电压 4V/cm ,电泳 1.5 小时。

4.琼脂扩散 在琼脂槽内加入兔抗人血清,使其充满槽内,置湿盒内 3 7 ℃ 扩散 24 小时,观察结果。

【结果观察】

在琼脂槽的两边出现相对称的弧形沉淀线。

【注意事项】

1.电泳扩散后可直接在黑色背景下,用斜射光观察。

2.电泳时,搭桥应完全紧密接触,以免因电流不均而发生沉淀线弯曲。

【作业】

1.绘琼脂板上弧形沉淀线图。

2.为什么免疫电泳法比免疫琼脂双向扩散法灵敏?

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