蛋白质组学

电泳相关溶液配制==2D 双向凝胶电泳

1、 水化上样缓冲液( I ) :
尿素 8M 4.805g
CHAPS 4% 0.4g
DTT 65mM 0.098g (现加)
Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50 m l ( 40% )(现加)
溴酚蓝 0.001% 10 m l ( 1% 溴酚蓝)
MilliQ 水 定容至 10ml
分装成 10 小管,每小管 1ml , -20 ℃冰箱保存。

2、水化上样缓冲液( II ):
尿素 7M 4.2g
硫脲 2M 1.52g
CHAPS 4% 0.4g
DTT 65mM 0.098g (现加)
Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50 m l ( 40% )(现加)
溴酚蓝 0.001% 10 m l ( 1% 溴酚蓝)
MilliQ 水 定容至 10ml
分装成 10 小管,每小管 1ml , -20 ℃冰箱保存。

3、水化上样缓冲液( III ) :
尿素 5M 3.0g
硫脲 2M 1.52g
CHAPS 2% 0.2g
SB 3-10 2% 0.2g
DTT 65mM 0.098g (现加)
Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50 m l ( 40% )(现加)
溴酚蓝 0.001% 10 m l ( 1% 溴酚蓝)
MilliQ 水 定容至 10ml
分装成 10 小管,每小管 1ml , -20 ℃冰箱保存。

4、胶条平衡缓冲液母液 :
尿素 6M 36g
SDS 2% 2g
Tris-HCl 0.375M pH8.8 25ml ( 1.5M pH8.8 Tris-HCl )
甘油 20% 20ml
MilliQ 水 定容至 100ml
分装成 10 管,每管 10ml , -20 ℃冰箱保存。

5、胶条平衡缓冲液 I :
胶条平衡缓冲液母液 10ml
DTT 0.2g
充分混匀,用时现配。

6、胶条平衡缓冲液 II :
胶条平衡缓冲液母液 10ml
碘乙酰胺 0.25g
充分混匀,用时现配。

7、低熔点琼脂糖封胶液 :
低熔点琼脂糖 0.5% 0.5g
Tris 25mM 0.303g
甘氨酸 192mM 1.44g
SDS 0.1% 1ml ( 10% SDS )
溴酚蓝 0.001% 100 m l ( 1% 溴酚蓝)
MilliQ 水 定容至 100ml
加热溶解至澄清,室温保存。

8、30% 聚丙烯酰胺贮液 :
丙烯酰胺 150g
甲叉双丙烯酰胺 4g
MilliQ 水 500ml
滤纸过滤后,棕色瓶 4 ℃冰箱保存。

9、 1.5mol/L Tris 碱 pH8.8 :
Tris 碱 90.75g
MilliQ 水 400ml
用 1mol/L HCl 调 pH 至 8.8 ,加 MilliQ 水定容至 500ml 。 4 ℃冰箱保存。
9、10% SDS :
SDS 10g
MilliQ 水 100ml
混匀后,室温保存。

10、 10% Ap :过硫酸铵
Ap 0.1g
MilliQ 水 1ml (用时加水溶解)
溶解后, 4 ℃冰箱保存。

11、 10 ×电泳缓冲液: ( 1 × = 25mM Tris , 192mM glycine , 0.1% SDS , pH8.3 )
Tris 碱 30g
甘氨酸 144g
SDS 10g
MilliQ 水 1L
混匀后,室温保存。

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