蛋白质组学

肿瘤琼脂糖凝胶电泳标本的拍摄方法

在医学肿瘤科学实验中,分子生物学、生物化学等一些科学实验,必须通过肿瘤电泳图像来加以验证和评定。实验的最后结果一旦完成,就应及时地用摄影的手段把它记录下来。由于肿瘤电泳标本实验结果显现的时间有限,来不及请专业摄影师的协助。因此实验结果的拍摄任务,大多由实验人员亲自操作。由于实验室工作人员对摄影知识掌握的程度有别,往往由于肿瘤电泳标本的拍摄失误而造成整个实验过程的失败。为保证肿瘤电泳标本的拍摄质量,避免因拍摄失误而造成的损失,我们对琼脂糖凝胶肿瘤电泳标本拍摄的方法进行了更加深入的探讨。

1 材料

拍摄肿瘤电泳标本应具备的设备有照像机、近摄接圈、翻拍架、电源稳压器、紫外光灯箱、红滤色镜、快门线等。

1.1 照相机

照相机应具备超近距离拍摄的条件; 镜头要有较高的分辨力; 快门机构要有长时间曝光的B 门装置,并且要有能安装快门线的螺孔。一般多使用单镜头反光照相机。如果使用能够双倍伸长暗腔机构的相机则效果更佳。

1.2 近摄接圈

若使用单镜头反光照相机拍摄,必须加用近摄接圈。只有加用近摄接圈,拍摄时才能使肿瘤电泳标本占满画面。在使用近摄接圈时,因增加了机身与镜头之间的距离,照相机自动收缩光圈的机构失效。因此拍摄时应先放大光圈,进行准确调焦,而后再将光圈调小到所需要的大小进行拍摄。

1.3 翻拍架

翻拍架的主要作用是固定照相机。在拍摄时,因曝光时间较长,照相机必须稳定在一定的位置上,否则就无法得到清晰的影像。因拍摄时的物距很短,使用翻拍架比使用三角架更为方便。

1.4 电源稳压器

光源电压的波动,直接影响着光源的亮度稳定,光源亮度的稳定又直接影响着拍摄时曝光值的精度。因此,为保证肿瘤电泳标本拍摄时曝光的准确性,最好使用一台稳定光源电压的电源稳压器。在每次实验结果的拍摄之前,必须先核实稳压电源输出电压的标准值。电压如不在标准值上,就应先进行调整,而后再进行拍摄。

1.5 紫外光灯箱

紫外光灯箱的作用是提供肿瘤电泳标本拍摄的紫外光源。因为琼脂糖上所记录的荧光标记条带,在通常可见光的透射下是看不到的,只有受紫外光线的激发时,荧光标记物在灯箱的暗环境下才能显示出清晰明亮的橙红色条带。

1.6 红滤色镜

琼脂糖上所记录的肿瘤标本条带,只有在透射的紫外光下观看才能获得最佳的视觉效果。拍摄使用的全色胶片对蓝、紫色光以及紫外光的反应较为敏感。使用红滤色镜的主要作用是使肿瘤标本条带的橙红色光更多地到达胶片感光面,拉大肿瘤标本条带与琼脂糖表面的密度差,使肿瘤标本的拍摄获得良好的效果。

1.7 快门线

因标本拍摄曝光时间较长,为了避免用手直接触动相机的快门使相机受到震动,快门的开启须用快门线来控制。

2 方法

操作时首先在相机的机身与镜头之间加上能使装载肿瘤标本的琼脂糖充满取景画面的近摄接圈,镜头前要加装上红滤色镜。装好GB21O黑白胶卷,再将照相机固定在翻拍架上。然后将紫外光灯箱的屏面向上,平放在翻拍架的平台上。再将肿瘤电泳的琼脂糖凝胶平放在紫外光灯箱的屏面上。最后打开稳压电源的开关,即可进行拍摄。从拍摄的照片我们可以看到,胶片按比例记录亮度范围的能力得到了充分的发挥。最大密度部分已经很浓重了,而琼脂糖凝胶与灯箱屏面的交接线很容易辨别。肿瘤标本条带部分的影调层次几乎没有受到任何损失,高光部分的亮度也得到了良好的体现。我们使用上述方法拍摄的肿瘤耐药基因MDR21 及其他DNA 琼脂糖凝胶肿瘤电泳标本,可见曝光准确、反差适宜、影调层次丰富、银盐颗粒微细、标本条带清晰。

3 讨论

在拍摄肿瘤电泳标本的过程中,一定要本着严谨科学的工作态度去操作。

3.1 照相机的定位要领

在固定相机与标本位置时,要注意镜头主光轴与标本平面的垂直,标本的中心要摆放在镜头主光轴的垂线上。否则将会产生以下两种现象:

因拍摄时镜头的物距超近,透视作用就必然明显。镜头的主光轴与标本的中心如果不够垂直,将会造成因透视作用产生的变形现象。如果镜头的主光轴与标本的中心不够垂直,标本四周各点到镜头前节点的距离就不相等。这样将会造成拍摄画面的局部焦点不实。拍摄画面的局部将会产生影像虚松现象。

3.2 光圈与快门的曝光组合

曝光时要兼顾到有足够的景深清晰范围和倒易律失效的问题: 因加近摄接圈拍摄体积很小的肿瘤标本,镜头的物距相当小,影像的景深范围就会受到很大的限制。为了保证拍摄影像有足够的清晰度,必须收缩一定的光圈级数来提高影像的影深范围加近摄接圈拍摄,因像距的增加,到达感光面的通光量就必然下降; 作为光源的紫外光灯箱的亮度也有局限; 还必须收缩一定的光圈级数来提高影像的清晰度。由于以上多种因素的制约,曝光的时间就必然要延长。如果曝光时间超过了倒易律的允许范围,拍摄画面的影调层次将会受到损失,影像的反差也会发生变化。

因此,既要保证影像的清晰度,又要保证画面的影调层次,光圈与快门的组合就显得尤为重要。我们拍摄曝光时的光圈一般控制在F4 至F5.6 之间,曝光时间采取B 门手工控制在2 秒左右(此曝光条件仅供参考)。

3.3 曝光时值的控制

只有把曝光的时值控制准确,胶片宽容度能按比例记录亮度范围的能力才能够得到充分的发挥。用手工控制快门的速度,就有一个曝光时值的精度问题需要解决。我们解决这个问题的办法很简单。用一个暗室定时钟,放在翻拍架的旁边。曝光时用眼睛看着定时钟的表盘,当快门揿动的同时,观察表盘上秒针所走时值刻度来计时。采用这种方法控制曝光时值较为准确。我们经过多次重复曝光实验,胶片经过标准

的条件冲洗,没有发现胶片密度有不一致的现象。

3.4 胶片的选用

拍摄时所用的胶片应选用感光度较高的全色胶片。因感光度高的胶片可提高曝光时快门速度、避免倒易律失效、保证画面影调层次的显现。全色胶片可保证标本条带橙红色光在胶片上的正确反应。我们使用GB210 乐凯黑白全色胶卷,拍摄效果均较满意。

因肿瘤标本条带是橙红色的,拍摄时镜头前还要加红滤色镜,所以禁忌使用感色范围狭窄的胶片(分色片、色盲片)。因此类胶片对红色光的反应迟钝,或不反应。

3.5 胶片的冲洗

胶片的冲洗我们选用了D-76 微粒显影液,显影药温20 ℃,显影时间7 分钟。在冲洗时尽量做到精确的定时定温,以此来保证胶片冲洗质量的稳定。总之,肿瘤电泳标本的拍摄质量,直接影响到实验研究的结果。为避免不可挽救的损失,在拍摄时对每一环节的操作都要做到准确无误,才能为科学实验提供高质量的肿瘤电泳照片。

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