蛋白质组学

急性脊髓损伤蛋白质的双向电泳分析和质谱鉴定

摘要:

目的 建立急性脊髓损伤双向凝胶电泳图谱,初步观察急性脊髓损伤组织中蛋白质组的变化与差异表达,为进一步探讨急性脊髓损伤分子机制奠定了基础。 方法 采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白,银染显色,Image Master图象分析系统分析,从胶中选取分离蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI2TOF2MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF),Mascot 软件搜索MSDP、SWISS2PROT数据库鉴定蛋白质。 结果 获得重复性和分辨率较好的脊髓双向凝胶电泳图谱。质谱分析了12 个蛋白质点,获取6 张肽质量指纹图谱。通过查询数据库鉴定了9 个蛋白质。通过对过表达脊髓损伤中蛋白质表达谱改变的研究,鉴定出9 个差异表达蛋白质,这些蛋白质包括等。这些差异蛋白质涉及基因为上调蛋白钙蛋白酶Calpain、神经丝蛋白M Neurofilament tripletα12糖蛋白α12Acid2glycoprotein、Oxygen regulatedprotein 1 在脊髓损伤组下调。钙蛋白酶抑制剂Calpain inhibitor、假象蛋白210 Hypothetical protein cgi210 在脊髓损伤组消失。并在损伤组出现新蛋白预测蛋白Hypothetical 152. 1 kDa protein 和核内寡聚肽酶Endooligopeptidase A related protein。 结论 成功构建脊髓损伤与正常脊髓双向凝胶电泳图谱。并应用质谱技术鉴定了特异蛋白质点。在我们所鉴定的脊髓损伤过程中发生最显著变化的蛋白质中,有7 种蛋白具有与一致的变化趋势,其中钙蛋白酶、神经丝蛋白、神经营养素低亲合力受体(p75NTR) 、α12糖蛋白、氧调节蛋白1、钙蛋白酶抑制剂、假想蛋白210 表达上调、下调与消失变化在脊髓损伤中居极其重要地位。

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