蛋白质组学

蛋白的裂解与提取步骤

这是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol,希望对大家有所帮助。

10ml 三去污裂解液配方如下:
50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0): 0.07882g
150 mmol/L NaCl: 0.08775g
0.2 g/L叠氮钠: 0.002g
1 g/LSDS 0.01g
100 mg/L Aprotin 0.001g
10 g/L NP-40 0.1g
5 g/L去氧胆酸钠 0.05g
100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF) 0.001g

总蛋白抽提程序:
1.PBS洗细胞3 次
2.加入裂解缓冲液(1.5x106个细胞大约加入100µL 裂解液,或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液),
冰上放置20min
3.收集裂解液
4.离心,12000转,2~10min
5.吸取上清,蛋白定量,分装,保存在-80度备用

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