蛋白质组学

人尿微量白蛋白(mALB)酶联免疫分析

人尿微量白蛋白(mALB) 酶联免疫分析( ELISA

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称:

通用名:人 尿微量白蛋白(mALB) 酶联免疫 分析试剂盒

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中尿微量白蛋白( mALB) 的含量。

实验原理

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中人 尿微量白蛋白(mALB) 水平。用纯化的人 尿微量白蛋白(mALB) 抗体 包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入 尿微量白蛋白(mALB) ,和 HRP 标记的尿微量白蛋白( mALB) 抗原,使它们竞争结合,,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。样本颜色的深浅和样品中的 尿微量白蛋白(mALB) 的含量 呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值),通过标准曲线计算样品中 尿微量白蛋白(mALB) 的含量。

试剂盒组成

1

30 倍浓缩洗涤液

20ml × 1

8

标准品 S1 600μg/L

0.5ml × 1

2

酶标试剂

6ml × 1

标准品 S2 400 μg/L

0.5ml × 1

3

酶标包被板

12 孔× 8

标准品 S3 200 μg/L

0.5ml × 1

4

显色剂 A

6ml × 1

标准品 S4 100 μg/L

0.5ml × 1

5

显色剂 B

6ml × 1

标准品 S5 50 μg/L

0.5ml × 1

6

终止液

6ml × 1/

9

说明书

1

7

样品稀释液

6ml × 1/

10

封板膜

2

标本要求

1 .标本处理:( 1 )水样 采集后经 -20 反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查

2 )组织 样品用丁醇:甲醇:水(52570 VVV) 抽提 ,或按相关文献提取进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可 将标本放于 -20 保存,备查

2.不能检测含NaN3的样品 ,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP )活性。

操作步骤

1. 加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、 待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升,待测样品孔中先加样品稀释液 40 μ l ,然后再加待测样品 10 μ l (样品最终稀释度为 5 倍)。 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl ,空白孔除外。

3. 温育:用封板膜封板后置 37 温育6 0 分钟。

4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。

6. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl ,再加入显色剂 B50μl ,轻轻震荡混匀, 37 避光显色15 分钟.

7. , 终止:每孔加终止液 50μl ,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8. 测定:以空白空调零, 450nm 波长依序测量各孔的吸光度( OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标, OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3 .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数( ×n ×5 )。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6 .底物请避光保存。

7 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9 .本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

检测范围:

30 μg/L -700 μg/L

保存条件及有效期

1 .试剂盒保存: 2-8

2 .有效期: 6 个月

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