蛋白质组学

肾组织提总蛋白的方法

EDTA和Tris的混合液,配方:Tris-Cl (pH7.4) 20mM,EDTA 1mM.可加入蛋白酶抑制剂,提取磷酸化的蛋白还需加Na3VO4 0.1mM及NaF 25mM)。
⑴ 匀浆 对于组织,可每50~100mg加1ml裂解液,肺100~200mg加1ml裂解液。可手动或电动匀浆。注意尽量保持低温,快速匀浆。
⑵ 12000g离心,4℃,2min。
⑶ 取少量上清进行定量。
⑷ 将所有蛋白样品调至等浓度,充分混合沉淀加loading buffer后直接上样最好,剩余溶液(溶于1×loading buffer)可以低温储存,-70℃一个月,-20℃一周,4℃ 1~2天,每次上样前98℃,3min。

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