蛋白质组学

酵母蛋白的提取方法

1 准备SD/-Leu或是YPD 培养基20ml,酵母过夜培养,30℃,230rpm。
2 测OD600 约1.0。
3 100ml过夜培养物,1000g,离心,5min,4℃。
4 弃上清,重悬于80ul抽提buffer:
0.1M Tris-Cl(PH7.5),0.2M NaCl,0.01Mβ-ME,20%甘油,5mM EDTA,1mM PMSF。(100×):PMSF 0.1742g 溶于10ml 异戊醇(主要抑制丝氨酸蛋白激酶), RT保存。
5 转移上清到一预冷的玻璃管中,再加入玻璃珠33ul(425-600um)。冰上操作,涡流10min,但不包括样品的预冷时间。
6 回收玻璃珠,并尽可能取上清到另一预冷的玻璃管中。
7 40ul的抽提buffer,同上涡流。
8离心后分离上清(回收玻璃珠)。
9液氮快速冷冻,-70℃储存。
10 提取的蛋白量通常约10-20mg/ml, 2-5ul用于实验。

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