蛋白质组学

蛋白质的定量测定方法:紫外吸收法

实验目的
1. 学习紫外吸收法测定蛋白质含量的原理。
2. 掌握紫外分光光度计的操作方法。
【实验原理】
大多数蛋白质分子结构中含有芳香族氨基酸(酪氨酸和色氨酸)残基,使蛋白质在280nm的紫外光区产生最大吸收,并且这一波长范围内的吸收值与蛋白质浓度的成正比,利用这一特性可定量测定蛋白质的含量。
紫外吸收法可测定0.1-0.5mg/ml的蛋白质溶液,此操作简便,测定迅速,不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。因此,此法在蛋白质的制备中广泛应用。
【实验材料】
1. 实验器材
试管及试管架;50毫升容量瓶  2只;移液管;紫外分光光度计。
2. 实验 试剂
(1)标准蛋白质溶液:精确配制2mg/ml的酪蛋白溶液。
(2)样品溶液:配制约0.5mg/ml的酪蛋白溶液作为未知样品溶液。
实验操作
1. 绘制标准曲线
取7支试管按下列各表加入各 试剂 :

           管号
试剂 
0 1 2 3 4 5 6
标准蛋白质溶液(ml) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
蒸馏 水(ml) 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0
蛋白质浓度(mg/ml) 0.000 0.125 0.250 0.375 0.500 0.625 0.750

试剂加完后摇匀,在紫外分光光度计上,于280nm处以0号管为对照,分别测定各管溶液的光密度值。以光密度为纵座标,标准蛋白溶液浓度为横座标,绘制出标准曲线。
2. 测定未知样品
取样品溶液4毫升,加 蒸馏 水4ml混匀,在280nm下测定其光密度值。  
【实验结果】
根据样品溶液的光密度值,在绘制好的标准曲线图中查出样品溶液的蛋白质含量。

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