蛋白质组学

凝胶过滤原理

凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质,当带有多种成分的样品溶液在凝胶内运动时,由于它们的分子量不同而表现出速度的快慢,在缓冲液洗脱时,分子量大的物质不能进入凝胶孔内,而在凝胶间几乎是垂直的向下运动,而分子量小的物质则进入凝胶孔内进行“绕道”运行,这样就可以按分子量的大小,先后流出凝胶柱,达到分离的目的。

具有分子筛作用的物质很多,如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用最广,商品名是sephadex型号很多,从G10到G200,它的主要应用范围是:

①分级分离各种抗原与抗体;②去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片;③分析血清中的免疫复合物;④分子量的测定。

葡聚糖凝胶的种类与性能

葡聚糖又名右旋糖酐,在它们的长链间以三氯环氧丙烷交联剂交联而成。葡聚糖凝胶具有很强的吸水性,交联度大,吸水性小,相反交联度小,吸水性大。商品名以SephadexG表示,G值越小,交联度越大,吸水性越小,G值越大,交联度越小,吸水性就越大,二者呈反比关系,G值大约为吸水量的10倍。由此可以根据床体积而估算出葡聚糖凝胶干粉的用量。

表Sephadex1的种类与特性:

型号

分离范围 (分子量)

吸水量 (ml/g)

最小溶胀时(h) 20℃~25℃ 100℃

床体积(ml)/干凝胶(mg)

G10

<700

1.0±0.1

31

2~3

G15

<1 500

1.5±0.2

31

2.5~3.5

G25

<5 000

2.5±0.2

31

4~6

G50

1500~20 000

8.0±0.3

31

9~11

G75

3 000~70 000

7.5±0.5

241

12~15

G100

4 000~15 000

10.0±1.0

721

15~20

G150

5 000~800 000

15.0±1.5

721

20~30

G200

5 000~300 000

20.0±2.0

721

30~40

G25、G50有四种颗粒型号:粗(100µ~300µ)、中(50µ~150µ)、细(20µ~80µ)和超细(10µ~40µ)。G75~G200又有两种颗粒型号:中(40µ~120µ),超细(10µ~40µ)。颗粒越细,流速越慢,分离效果越好。

DEAE-纤维素与Sephadex1比较:

项目 DEAE Sephadex
交换量 较大
非特异性吸附 较大
分离纯度 较好
分离时间 较粗 较长
应用范围 较窄 较宽
预处理 繁琐 方便

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